一、生物顯微鏡的使用

　　(一)使用環(huán)境與工作習(xí)慣

　　1、使用環(huán)境

　　顯微鏡的工作場所應(yīng)當(dāng)清潔、干燥、無震動(dòng)、無腐蝕性氣體存在。

　　2、工作習(xí)慣

　　(1)臺(tái)面和凳子的高度要適當(dāng)。

　　(2)鏡檢時(shí)，即便用單目顯微鏡，也須兩眼同時(shí)睜開，用左眼觀察。以便右眼繪圖或記錄。如一只眼睜，一只眼閉，眼睛容易疲勞，無法久看。工作時(shí)間較長時(shí)，可兩眼輪流觀察。

　　(二)使用前的準(zhǔn)備

　　1、光學(xué)系統(tǒng)的安裝

　　對(duì)新購或已經(jīng)卸掉光學(xué)系統(tǒng)的顯微鏡，使用前必須先將顯微鏡安裝起來。安裝時(shí)，為了防止向下掉灰塵，應(yīng)按照先上后下的順序，即按照目鏡、物鏡、聚光鏡、反射鏡的順序來安裝。圖10-3-1為顯微鏡的安裝圖。箭頭所示為光學(xué)元件的安裝位置。

　　安裝物鏡時(shí)，應(yīng)先將鏡筒升高或載波物臺(tái)下降，使轉(zhuǎn)換器與載物臺(tái)之間保持一定的距離。握往物鏡，把它放入轉(zhuǎn)換器的螺絲口處，先略向反時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)，待物鏡配上絲紋后，再按順時(shí)針方向旋入，旋至中等程度松緊即可。安裝物鏡時(shí)，應(yīng)根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)，從小到大順時(shí)針安裝。轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，不要用手推著物鏡旋轉(zhuǎn)，那樣會(huì)使物鏡的光軸歪斜。用手捏著轉(zhuǎn)換器的轉(zhuǎn)動(dòng)盤旋轉(zhuǎn)，或用手扶著與物鏡轉(zhuǎn)換器銜接處的滾花外圓旋轉(zhuǎn)。

　　目鏡和物鏡裝好后，再將聚光鏡插入載物臺(tái)下面的聚光器支架內(nèi)。插入的高度應(yīng)使聚光器升至高時(shí)，聚光鏡上透鏡的端面稍低于載物臺(tái)的平面，以免載玻片與聚光器的鏡頭相碰。然后，將聚光器的固定螺絲旋緊。對(duì)非電光源的顯微鏡來說，后要把反射鏡插入聚光器下面的插孔內(nèi)。

　　2、校正光軸

　　校正光軸的意義在于使物鏡、目鏡、聚光鏡的主光軸和可變光欄的中心點(diǎn)重合在一條直線上。所以又叫做合軸調(diào)節(jié)或中心調(diào)節(jié)。如果光軸歪斜，會(huì)使像差增大，分辨率和清晰度都要下降。

　　檢查方法是將可變光欄開至大，把低倍物鏡旋入光軸，降低鏡筒，使物鏡與載物臺(tái)之間的距離小于該物鏡的工作距離(5mm以下)。不放標(biāo)本，調(diào)節(jié)反射鏡的角度，使視場亮;或調(diào)節(jié)光源燈的亮度，使視場明暗合適。

　　然后，拔掉目鏡，直接從鏡筒中觀察。一邊把可變光欄慢慢縮小或打開數(shù)次，當(dāng)光欄關(guān)至小時(shí)，光欄的像(此時(shí)只有一點(diǎn)點(diǎn))應(yīng)正好落在物鏡通光孔的中心。當(dāng)光欄開大到一定程度時(shí)，光欄孔的像應(yīng)正好與物鏡通光孔的黑圈相重合。若符合上述兩個(gè)條件，說明它們“合軸”。否則，就需要調(diào)整。

　　目鏡和物鏡都是固定的，無法進(jìn)行調(diào)整。合軸調(diào)節(jié)主要是調(diào)整聚光鏡的位置。有些顯微鏡聚光器支架兩旁有兩個(gè)光軸校正螺絲，調(diào)節(jié)這兩個(gè)螺絲，即可合軸。另一種聚光器是由框架上三個(gè)相隔120°的螺絲支持住，其中一個(gè)裝有彈簧，可以伸縮;另外兩個(gè)螺絲，可以旋動(dòng)。調(diào)整這兩個(gè)螺絲，便可合軸。

　　顯微鏡的光軸校正好后，如果沒有拆下聚光器或其它特殊原因，不必經(jīng)常校正。

　　3、準(zhǔn)備好標(biāo)本

　　準(zhǔn)備好高質(zhì)量的標(biāo)本備用。

　　(三)反射鏡、聚光器的使用方法和對(duì)光方法1、調(diào)光

　　對(duì)采用反射鏡的的顯微鏡，一般都使用平面反射鏡去反射太陽的散射光。只有在光線不足或窗外有干擾時(shí)，才使用凹面反射鏡。

　　采用電光源的顯微鏡，將光亮調(diào)合適即行。

　　2、聚光器的用法

　　(1)聚光器高度的調(diào)節(jié) 一般的聚光鏡，在平行光照射的情況下，其焦點(diǎn)落在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm處。當(dāng)使用高倍鏡或油鏡時(shí)，由于放大率大，鏡像亮度小，需要較強(qiáng)的照明。因此，應(yīng)把聚光器升至高，以便使聚光鏡的焦點(diǎn)正好落在標(biāo)本平面上。但在使用低倍物鏡時(shí)，可將聚光器適當(dāng)下降。

　　(2)可變光欄的用法 可變光欄起兩個(gè)作用。一是控制射向標(biāo)本的光通量;二是改變聚光器的數(shù)值孔徑。在這兩個(gè)作用中，后者是主要的。為了使物鏡的分辨率得到充分的利用，從原則上說，聚光器的數(shù)值孔徑應(yīng)與物鏡的相同。否則，分辨率或清晰度會(huì)受影響。

　　3、對(duì)光方法

　　對(duì)電光源顯微鏡來說，使用時(shí)，只要將光調(diào)節(jié)在合適的亮度即行。不需要進(jìn)行對(duì)光。但對(duì)使用自然光的低檔顯微鏡來說，要想獲得良好的觀察效果，必須充分利用照明光線。因此，鏡檢之前應(yīng)先對(duì)光。對(duì)光時(shí)，將低倍鏡旋入光軸，聚光器適當(dāng)升高，可變光欄開至大。然后，從目鏡中觀察，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)反射鏡，直至視場明亮、清晰為止。如果利用自然光，則盡量躲避窗框和窗外樹枝的干擾。

　　(四)物鏡的正確調(diào)焦

　　對(duì)光完成后或調(diào)節(jié)合適光亮后，升高鏡筒或降低載物臺(tái)，將標(biāo)本玻片夾在移動(dòng)器即標(biāo)本夾上，并將欲檢查的部分移至載物臺(tái)通光孔的中央，然后開始調(diào)焦。

　　無論作何種檢查，均應(yīng)從低倍鏡開始。調(diào)焦時(shí)，先用粗動(dòng)手輪將鏡筒下降，使低倍鏡的前透鏡與蓋玻片之間的距離略小于該物鏡的工作距離(5mm以下)。為了避免物鏡壓在標(biāo)本玻片上，可從側(cè)面窺視。然后，一邊從目鏡中觀察視野，一邊利用粗動(dòng)手輪將鏡筒徐徐上升，待初見物像后，改用微動(dòng)手輪作精細(xì)調(diào)焦，直至物像清晰為至。低倍物鏡的視場大，有利于觀察標(biāo)本的全貌。也可利用移動(dòng)器或縱、橫向調(diào)節(jié)手輪尋覓所觀察的目標(biāo)。如有必要，可將尋得的目標(biāo)移至視場的中心，為高倍鏡觀察作好準(zhǔn)備。

　　從低倍物鏡轉(zhuǎn)換為高倍物鏡時(shí)，如果物鏡是顯微鏡的原配，所用的載玻片、蓋玻片又符合標(biāo)準(zhǔn)，一般都可以進(jìn)行“等高轉(zhuǎn)換”。即轉(zhuǎn)換后，只要稍微調(diào)節(jié)一下微調(diào)旋鈕，即可看到清晰的圖像。但油鏡不強(qiáng)求齊焦，先將鏡筒升高后再轉(zhuǎn)換，后按低倍鏡的調(diào)焦方法重新調(diào)焦。

　　使用油鏡的方法如下：先將鏡筒升高，取下標(biāo)本玻片，稍稍降低聚光器，并在聚光器的鏡頭上滴兩滴香柏油(油中不應(yīng)有氣泡。如有，可用小木簽除去)，再將標(biāo)本玻片放回原處，把聚光器升高，使載玻片的底面與香柏油接觸。這樣，就完成了聚光鏡的油浸。接著，在蓋玻片上滴上1滴香柏油。然后從側(cè)面窺視，利用粗調(diào)使鏡筒盡量下降，直至油鏡的前透鏡浸沒在香柏油中(但尚未接觸玻片)，這樣，又完成了物鏡的油浸。然后，一邊從目鏡中觀察，一邊利用微動(dòng)手輪將鏡筒緩緩上升(注意不要擰錯(cuò)了方向，壓碎蓋玻片)，直至視野中出現(xiàn)清晰的物像為止。

　　聚光鏡的油浸，還可以采用另一種滴油方法：即不直接把油滴在聚光器的鏡頭上，而是把載玻片翻過來，將油滴在載玻片的底面上，然后再翻過去，對(duì)準(zhǔn)放置于聚光器上面，再使聚光器上升，來完成聚光器的油浸。這種方法雖然不那么順手，但比較安全。有些人使用玻璃棒直接與聚光鏡接觸來涂抹香柏油，這種方法容易劃傷鏡片，不宜采用。

　　在使用油鏡時(shí)，允許在聚光鏡與標(biāo)本之間不加香柏油，即聚光鏡上仍以空氣為介質(zhì)，但這會(huì)犧牲物鏡的分辨率。

　　如用油鏡觀察后，如又需要轉(zhuǎn)回高倍物鏡觀察，應(yīng)將蓋玻片上的油擦去，以免沾污高倍物鏡。但聚光器上的油可以不擦，只要把光欄適當(dāng)縮小一點(diǎn)即可。

　　油鏡使用完畢后，要及時(shí)將香柏油擦拭干凈。鏡頭上可先用干凈的擦鏡紙擦1～2次，把大部分的油擦掉。然后用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦兩次，后用擦鏡紙擦干凈即行。聚光鏡的擦拭方法與此相同。如標(biāo)本需要保存，玻片上的香柏油可用“拉紙法”擦拭干凈。即將擦鏡紙復(fù)蓋在玻片上，在紙上滴上一滴二甲苯，趁濕將紙條平拖著往外拉，連續(xù)幾次即可擦干凈。